（一）常規(guī)石蠟切片的制備：
（1）取材與固定：切取組織時應(yīng)使用鋒利的刀、剪，切取組織塊時，從刀的根部開始向后拉動切開組織。組織塊的厚度約為0.2~0.3cm，大小為1.5cm x 1.5cm x 0.3cm為宜。取好的組織塊用10%福爾馬林溶液固定24~48h。
（2）包埋：先經(jīng)梯度乙醇脫水后用二甲苯透明，然后入溶融的石蠟中浸透每次30min，共3次；再包埋。
（3）切片：包埋好的石蠟塊即可進(jìn)行切片；切片的厚度為5μm左右。
（二）蘇木精－伊紅（hematoxylin and eosin,HE）染色方法：
（1）脫蠟：主要用二甲苯脫蠟。
（2）梯度乙醇水化。
（3）自來水沖洗。
（4）蘇木精染色：水化后的切片放入蘇木精染液中浸5~20min，染細(xì)胞核。自來水沖洗3~5min。
（5）1％鹽酸乙醇分化5~30s。自來水沖洗1~3min。
（6）弱堿性水溶液返藍(lán)30s~1min。自來水充分沖洗5~10分鐘。
（7）伊紅染色：充分水化后的切片直接入伊紅染色液中，染細(xì)胞質(zhì)5~15min左右。
（8）梯度乙醇脫水。
（9）二甲苯透明。
（10）中性樹膠封片。
二、組織化學(xué)及免疫組織化學(xué)技術(shù)
（一）組織化學(xué)（histochemistry）：一般稱為特殊染色，基本原理是通過應(yīng)用某些能與組織細(xì)胞化學(xué)成分特異性結(jié)合的顯色試劑，定位地顯示組織細(xì)胞的特殊化學(xué)成分并保持原有的形態(tài)學(xué)改變，對一些代謝性疾病的診斷具有一定的參考價值。通過光鏡或電鏡觀察，可以檢測組織切片內(nèi)的蛋白質(zhì)、糖類、脂類、酶類、核酸與某些金屬元素等。
1.過碘酸雪夫氏染色（periodic acid-schiff stain，PAS染色）：過碘酸是一種氧化劑，它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1.2乙二醇基使之變?yōu)槎?，醛與Schiff氏試劑結(jié)合，形成紅色的取代色素而得到定位。PAS染色可顯示糖原、中性黏液物質(zhì)、基底膜、軟骨、垂體、霉菌
及寄生蟲等物質(zhì)。是廣泛應(yīng)用的染色方法。在腎小球腎炎時PAS染色可顯示基底膜和系膜區(qū)的改變。
染色方法：
（1）切片按常規(guī)脫蠟水洗，再用蒸餾水洗滌。
（2）0.5%~1％過碘酸水溶液氧化5~10min。
（3）蒸餾水充分洗滌，至少3次。
（4）Schiff氏試劑染10~30min。
（5）傾去染液后，直接用亞硫酸沖洗液處理切片3次，每次2 min，以達(dá)到分化。
（6）自來水沖洗5~10 min，使之顯現(xiàn)出紅色。然后蒸餾水洗1次。
（7）明礬蘇木精染核，自來水充分洗滌。
（8）95%乙醇及無水乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。
結(jié)果判定：PAS陽性物質(zhì)呈鮮紫紅色，其它組織淡粉紅色，細(xì)胞核呈淺藍(lán)色。
2.結(jié)締組織的染色方法
一般所說的結(jié)締組織是指纖維性結(jié)締組織而言，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)基質(zhì)外含有較多的纖維成分，主要是膠原纖維、彈性纖維和網(wǎng)狀纖維，我們僅簡述這三種纖維的常見染色方法。
（1）Mallory三色染色法：常用于判定多種組織、器官的病變程度及修復(fù)情況，區(qū)分腫瘤組織中的纖維成分與平滑肌。
染色步驟：
①中性甲醛液固定組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。
②重鉻酸鉀液10min。
③蒸餾水沖洗2min，蒸餾水2次。
④酸性復(fù)紅液2min，蒸餾水稍洗。
⑤苯胺藍(lán)液20min，95%乙醇快速分化。
⑥直接用無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
結(jié)果判定：膠原和網(wǎng)狀纖維呈藍(lán)色。
（2）Van Gieson苦味酸酸性復(fù)紅法：可以顯示組織、器官的損傷、修復(fù)及硬化情況，特別是用于鑒別腫瘤組織中的膠原纖維與平滑肌纖維，可為診斷提供重要依據(jù)。
染色步驟：
①組織切片按常規(guī)脫蠟水洗。
②用Weigert蘇木素液染細(xì)胞核5~l0 min。
③自來水充分洗滌數(shù)分鐘。
④用顯微鏡檢查細(xì)胞核的著色程度，過深可用0.5%鹽酸乙醇分化。
⑤自來水洗至變藍(lán)；用蒸餾水洗。
⑥用Van Gieson液染1~5 min。
⑦傾去染液，直接用95%乙醇分化和脫水。
⑧無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
結(jié)果判定： 膠原纖維呈深粉紅色，肌纖維、胞漿及紅細(xì)胞黃色，細(xì)胞核呈棕黑色或蘭黑色。