藥物治療的前提是它們與細(xì)胞靶點(diǎn)的物理結(jié)合。這種結(jié)合的測(cè)定往往是在體外進(jìn)行，無(wú)法充分模擬細(xì)胞內(nèi)的復(fù)雜環(huán)境?？茖W(xué)家近日開(kāi)發(fā)出一種新方法，可直接評(píng)估活細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)作用的動(dòng)態(tài)過(guò)程。

闡釋小分子調(diào)節(jié)劑如何與細(xì)胞內(nèi)的靶點(diǎn)結(jié)合，對(duì)了解藥理機(jī)制十分關(guān)鍵。除了靶點(diǎn)作用（target engagement）的特異性和親和力，非平衡條件的結(jié)合動(dòng)力學(xué)也決定了候選藥物的治療潛力。這些參數(shù)通常是通過(guò)生化方法來(lái)評(píng)估的，但無(wú)法充分模擬細(xì)胞內(nèi)的復(fù)雜性。出于這個(gè)原因，制藥行業(yè)一直希望在完整細(xì)胞內(nèi)評(píng)估靶點(diǎn)作用。

科學(xué)家利用NanoLuc技術(shù)開(kāi)發(fā)出一種新方法，可測(cè)定活細(xì)胞中的靶點(diǎn)停留（target residence），作為靶點(diǎn)作用的重要方面。這種技術(shù)利用生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET），允許實(shí)時(shí)測(cè)定活細(xì)胞內(nèi)藥物與蛋白靶點(diǎn)的結(jié)合。

為了檢測(cè)藥物-靶點(diǎn)的相互作用，NanoBRET技術(shù)采用細(xì)胞通透性的熒光示蹤劑，旨在與NanoLuc標(biāo)記的蛋白靶點(diǎn)相互作用。這種相互作用的結(jié)果是NanoLuc蛋白的能量轉(zhuǎn)移到示蹤劑上，產(chǎn)生一種可測(cè)量的信號(hào)。

如果小分子候選藥物與蛋白靶點(diǎn)相互作用，示蹤劑就需要和藥物競(jìng)爭(zhēng)，這樣BRET信號(hào)減弱。藥物停留時(shí)間的測(cè)定依賴于化合物的預(yù)平衡、過(guò)量化合物的去除，以及示蹤劑的添加。實(shí)時(shí)信號(hào)監(jiān)測(cè)顯示，緩慢解離的化合物阻礙示蹤劑的結(jié)合，使得BRET信號(hào)緩慢產(chǎn)生。

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