ELISA試劑盒技術(shù)咨詢問題

靈 敏 度

試劑盒能檢測(cè)到待測(cè)抗原的zui低濃度。（zui小檢出量）

檢 測(cè) 下 限

試劑盒使用該樣本的處理方法，能檢測(cè)到樣本中待測(cè)藥物的zui低含量                      （檢測(cè)下限=靈敏度*稀釋倍數(shù)）

交 叉 率

指在同一測(cè)定方法中有兩種以上的不同抗原對(duì)一種抗體同樣特異性結(jié)合

回  收  率

（添加管濃度-空白管濃度）/添加量*100%

添加范圍：檢測(cè)下限以上~曲線zui大濃度

添加濃度：第三標(biāo)準(zhǔn)~第四標(biāo)準(zhǔn)濃度之間

單位換算：高標(biāo)準(zhǔn)100ppb添加10ul等于添加1ppb

樣  本  處  理

采取樣本：去除脂肪的勻漿樣本

樣本解凍：嚴(yán)禁直接放入水中解凍（由于多個(gè)樣本和水的原因，可能造成假陽性），可室溫放置或密封后放入水中解凍

試劑的配制，加入有機(jī)溶液的量，震蕩時(shí)間嚴(yán)格按照說明書操作

離心：zui終分離效果好，需要相層清澈透明

取相：靠壁輕吸所需相層，嚴(yán)禁吸到其它相層（其它相層可造成假陽性）

凈化：加入正己烷凈化，復(fù)溶液提取，充分混勻

酶 免 步 驟

加樣點(diǎn)板

洗板

酶標(biāo)儀的使用（450nm）

試劑盒注意事項(xiàng)

詳見說明書

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常見問題處理

出現(xiàn)問題

出現(xiàn)問題的原因

解決辦法

    曲           線

OD值不正常

試劑盒未回溫

試劑盒回溫到25℃

溫度控制不好

控制正確溫度

孵育時(shí)間不準(zhǔn)確

控制孵育時(shí)間

洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長(zhǎng)、

洗滌次數(shù)增加

洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干

陽光直射，對(duì)著風(fēng)直接吹

避風(fēng)避光

酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)錯(cuò)誤

酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)450nm

抗體的稀釋錯(cuò)誤

正確的稀釋抗體

水質(zhì)問題

用娃哈哈礦泉水代替

白   板

洗滌液配制錯(cuò)誤

正確的配制洗滌液

少加液體（抗體、酶標(biāo)記物、A液、B液）

正確的步驟加液體

錯(cuò)加液體

無 梯 度

標(biāo)準(zhǔn)品也污染

換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板

OD值不正常

控制溫度時(shí)間在做一次

人為點(diǎn)板

/

線 性 不 好

OD值不正常

控制溫度時(shí)間在做一次

人為點(diǎn)板

/

回   收    率

空白管陽性高

樣本本身就是陽性樣本

換陰性樣本做回收率

空白管在實(shí)驗(yàn)中被污染

實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染

水質(zhì)原因

用娃哈哈礦泉水代替

偏  高

添加量不準(zhǔn)確

的添加量

添加濃度不適合

添加合適的濃度

取液吹干量多

準(zhǔn)確的取液吹干

取到其它相層液體

取需用相吹干

復(fù)溶液未稀釋或加入量少

正確的稀釋復(fù)溶液

偏  低

添加量不準(zhǔn)確

的添加量

添加濃度不適合

添加合適的濃度

取液吹干量少

準(zhǔn)確的取液吹干

復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或加入量多

正確的稀釋復(fù)溶液

出現(xiàn)問題

出現(xiàn)問題的原因

解決辦法

假陰、陽性

水質(zhì)原因

點(diǎn)復(fù)溶液驗(yàn)證

用娃哈哈礦泉水代替

實(shí)驗(yàn)操作原因

吸取到其它相吹干

準(zhǔn)確的取液吹干

離心不*

延長(zhǎng)離心時(shí)間

樣本的污染

更換樣本

乳化未處理*

溫?。?0℃）處理乳化現(xiàn)象

儀器試劑原因

離心管未清洗干凈

正確的洗滌器具

有機(jī)溶劑的影響

做試劑空白看影響結(jié)果

衍生化試劑原因（長(zhǎng)時(shí)間衍生化試劑變質(zhì)）

更換衍生化試劑

與曲線好壞相關(guān)

保證曲線的正常

金標(biāo)檢測(cè)（T）線顏色較淺

尿液pH偏堿性

用0.01M HCl調(diào)節(jié)尿液pH值到7.0左右。

尿樣滴加過多

重新測(cè)定，尿樣按照說明書，控制在2滴

尿液過于混濁

將尿液離心后，取上清液重新測(cè)定

金標(biāo)質(zhì)控（C）線不出現(xiàn)

檢測(cè)卡由于高溫、受潮等原因失效

尿樣需要重新檢測(cè)。

過了有效期失效。

該批號(hào)的金標(biāo)應(yīng)丟棄處理，尿液需要重新檢測(cè)

操作過程中檢測(cè)卡沒有平放，導(dǎo)致液體樣品直接沖過檢測(cè)區(qū)

尿樣需要重新檢測(cè)，且檢測(cè)卡平放于桌面上再加樣。

尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應(yīng)的物質(zhì)（比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等）

該尿液的檢測(cè)結(jié)果無效

金標(biāo)卡上在除了T和C線之外的其他地方出線

金標(biāo)卡上的劃痕；膠體金在跑板過程中沒有*跑干凈而在卡上的痕跡；

該檢測(cè)卡結(jié)果不可信，尿液需要重新檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)重復(fù)性不好

操作人員的不一致，取樣的不一致，樣本數(shù)量的多少，加樣時(shí)間的長(zhǎng)短，洗滌條件不一致，加樣量不一致

盡量保持的實(shí)驗(yàn)一致性

分析軟件的使用

不能設(shè)置和保存

正確的設(shè)置和保存

如何判斷曲線的好壞和分析結(jié)果

正確的判斷曲線的好壞和分析結(jié)果