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三磷酸腺苷ATP含量測(cè)定試劑盒真的太棒了!

更新時(shí)間:2018-03-13      瀏覽次數(shù):1311

三磷酸腺苷ATP含量測(cè)定試劑盒真的太棒了!

產(chǎn)品說明:

三磷酸腺苷(adenosine 5'-triphosphate,ATP)是生物體內(nèi)能量轉(zhuǎn)換zui基本的載體, 其含量的變 化直接關(guān)系到各器官的能量代謝。ATP 作為zui重要的能量分子在細(xì)胞的各種生理、病理過程中起著 重要作用。ATP 水平的改變,會(huì)影響許多細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài) 下,ATP 水平會(huì)下降,而高葡萄糖刺激等對(duì)于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi) ATP 水平。通常 ATP 水平 的下降表明線粒體的功能受損或下降,在細(xì)胞凋亡時(shí) ATP 水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同 時(shí)發(fā)生狀態(tài)。ATP 含量測(cè)定試劑盒可以用于檢測(cè)紅細(xì)胞或組織內(nèi)的 ATP 水平。

分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、臺(tái)式離心機(jī)、研缽和蒸餾水。

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一、樣本前處理:

1、紅細(xì)胞:抗凝全血取下層積壓紅細(xì)胞,一般按 1:4 的體積比加雙蒸水進(jìn)行稀釋,再混勻使溶血*,制備成溶血液。將制好的溶血液加入玻璃試管中沸水加熱煮 10 分鐘,取出混勻抽提 1 分鐘, 4000 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 10 分鐘,取上清液待測(cè)。

2、組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重,按質(zhì)量(g):體積(mL)為 1:9 的比例加入 9 倍體積的沸雙蒸水, 制成 10%的勻漿液,再置于沸水中煮 10min,取出混勻抽提 1min,3500 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 10min, 取上清液待測(cè)。

3、培養(yǎng)細(xì)胞:先離心處理將細(xì)胞核培養(yǎng)上清分離,棄上清,得到下層沉淀細(xì)胞(一般細(xì)胞數(shù)量達(dá) 到 106 個(gè)),將收集好的細(xì)胞加入 300-500μL 的熱雙蒸水,置于熱水浴(90-100℃)中勻漿破碎 后,將細(xì)胞懸液于沸水浴中加熱 10min,取出混勻抽提 1min(渦旋混勻),即可用于測(cè)定。(如 果存在大塊細(xì)胞碎片,需離心后取上清測(cè)定) 

注意:

1.要求不能有任何磷污染,建議用一次性塑料試管。

2.顯色應(yīng)用液配好后,不可放置太久,一般可保存 5 天,現(xiàn)配現(xiàn)用。

3.組織勻漿宜用 2%-5%濃度的勻漿上清,若樣本濃度過高,則底色過深(對(duì)照管 OD 過高),需稀釋 測(cè)定,一般通過預(yù)實(shí)驗(yàn)將對(duì)照 OD 值控制在 1.0 以下。

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