提取RNA如何保存才能防止RNase污染。

提取RNA或重復(fù)使用樣品時(shí)，可能會(huì)引入少量的RNase污染。正確的存儲(chǔ)可以減少RNase污染和隨之而來(lái)的樣品降解。有幾個(gè)可供選擇的用于存儲(chǔ)純化RNA的方法。
●用水性緩沖液溶解沉淀并存儲(chǔ)于-80℃。常用緩沖液包括TE ( 10mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA, pH 7.0)，含SDS (0.1%~0.5%)的TE (pH7.6)，含有0.1mmol/LEDTA(pH7.5)的DEPC處理水,或商品化的RNA儲(chǔ)存液(如RNA儲(chǔ)存液，Ambion)。RNA在-80℃下可穩(wěn)定保存1年。EDTA是一種鎂和其他金屬離子的螯合劑，可以避免這些金屬離子對(duì)RNA的非特異性降解;使用EDTA溶液要保證無(wú)RNase。SDS是一種核酸酶抑制劑:在用RNA作為模板之前，如用于引物延伸反應(yīng)、反轉(zhuǎn)錄或體外翻譯時(shí)，應(yīng)用lv仿抽提和標(biāo)準(zhǔn)乙醇沉淀法去除SDS。
●用鹽/乙醇混懸液( salt/ethanol slurry) 在-80℃下儲(chǔ)存RNA。將RNA按標(biāo)準(zhǔn)沉淀步驟沉淀，即鹽(1/10體積的3mol/L乙酸鈉)和乙醇(2倍體積的100%乙醇)在-80°C下存儲(chǔ)該混合物，不需要通過(guò)離心沉淀RNA。低pH、高乙醇含量及低溫的結(jié)合將穩(wěn)定RNA并抑制酶活性,這是長(zhǎng)期儲(chǔ)存RNA的shou選方法。當(dāng)需要時(shí)，可以使用自動(dòng)移液裝置回收RNA樣品。然而，由于沉淀的RNA是塊狀并有黏性，黏在一次性吸頭表面上會(huì)造成部分損失，導(dǎo)致RNA的回收量損失?？梢噪x心得到RNA沉淀，并溶解在水溶性緩沖液，然后再吸取。
●用去離子甲酰胺溶解沉淀，并儲(chǔ)存于-20°C。在這種條件下，RNA至少可以穩(wěn)定保存1年( Chomczynski 1992)。 甲酰胺提供了穩(wěn)定的化學(xué)環(huán)境,可保護(hù)RNA不被RNA酶降解。甲酰胺可以很快溶解純的無(wú)鹽RNA，濃度可大于4mg/mL，這樣濃度的RNA樣品可以直接進(jìn)行凝膠電泳、RT-PCR或RNase保護(hù)分析，既省時(shí)又避免了潛在因素的降解。如果需要，用4倍體積的乙醇進(jìn)行沉淀，如Chomczynski (1992)所述，或用0.2mol/L NaCl 4倍稀釋甲酰胺，然后加入常規(guī)2倍體積的乙醇(Nadin-Davis and Mezl 1982)可以回收溶于甲酰胺溶液中RNA.
當(dāng)從存儲(chǔ)狀態(tài)回收RNA樣品時(shí)，是在冰上解凍樣品，以避免被RNase降解。此外建議按使用量分裝RNA，這樣可避免反復(fù)凍融對(duì)RNA的損傷，并可防止RNase污染。