非血紅素鐵檢測試劑盒(紅菲咯啉微板法)的計算

產(chǎn)品簡介：

鐵是人體必需的微量元素之一，也是人體中含量最多的微量元素。鐵離子通常以三價鐵形式與轉鐵蛋白結合，通過轉鐵蛋白通道進入細胞，被金屬還原酶 STEAP3 還原成二價鐵后，參與后續(xù)多種生理和生化過程。機體內鐵元素的缺乏會引發(fā)各種缺鐵性疾病，如貧血、免疫力低下等，此外還會導致消化不良、記憶力低下等消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。然而，盡管鐵元素對于機體如此重要，卻也不是越多越好的。

進入細胞的鐵被還原成亞鐵離子后，會優(yōu)先形成各種鐵結合復合物，參與到各項生理和生化反應中去。當這些復合物含量接近飽和時，多余的二價鐵會在細胞中積累，形成不穩(wěn)定鐵池。鐵池中游離的二價鐵參與芬頓反應，生成以羥基自由基為代表的活性氧（ROS）物質，積累的 ROS 將膜脂過氧化，從而造成細胞功能喪失和細胞死亡。這是細胞鐵死亡的經(jīng)典調控途徑之一。

動物組織或細胞提取物中非血紅素鐵含量的多少，反應出細胞或組織貯存鐵含量的變化。非血紅素鐵含量的測定可避免總鐵含量測定中樣品內血紅素鐵的影響。

非血紅素鐵檢測試劑盒與總鐵測定方法相似，但樣品須經(jīng)酸和熱處理，經(jīng)離心后非血紅素鐵釋放到上清液中，而含血紅素鐵的蛋白則留在沉淀中。其測定原理是動物組織或細胞經(jīng)組織消化液在酸性加熱條件處理后，經(jīng)離心可分離出血紅素鐵和非血紅素鐵，非血紅素鐵再被還原劑還原為二價鐵后與紅菲咯啉生成紅色化合物，在500~550nm 有強吸收，可通過酶標儀或分光光度計測定。該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、1.5ml 離心管稱重。稱取 100mg 左右的組織，放入已稱重的離心管中，再次稱重。兩

次相減得到組織凈重。

2、制備樣品消化液：向離心管中加入組織消化液 1ml，65℃消化不少于 50h，中間用震蕩

器震蕩 3~5 次，每次不少于 10min，確保組織完全消化。用組織消化液定容至 1.5ml，

10000rpm 離心 5min，將管壁及蓋子上的液體甩下，將上清液轉移至新離心管，并定容

至 1.5ml，混合備用。

3、配制鐵顯色工作液：將菲啰啉溶液（試劑 C1）、TGA 溶液（試劑 C2）、乙酸鈉溶液（試

劑 C3）按照 3:3:5 配比得到鐵顯色工作液，需現(xiàn)配現(xiàn)用。

4、配制系列鐵標準液：將鐵標準儲液(100μg/ml)用蒸餾水稀釋至 20μg/ml，再按下表進

行操作，依次稀釋。

計算：

以系列鐵標準(1~5 號)(2、5、10、15、20μg/ml)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐

標，繪制標準曲線，求得回歸方程，以測定孔的吸光度代入回歸方程求得樣品消化液中的鐵

濃度，亦可不做標準梯度，直接進行單標準比色測定，一般選擇 5 或者 10μg/ml 的鐵標準。

組織鐵含量(μg/g)=C 測定×V/w

= A 測定/A 標準×V/w×C 標準

式中：

C 測定=經(jīng)標曲計算得出的樣品消化液中的鐵濃度(μg/ml)；

V=樣品消化液的總體積=1.5(ml)；

w=組織重量( g)；

C 標準=鐵標準濃度=5 或 10(μg/ml)。

注意事項：

1、操作中的手術器械、槍頭、容器、96 孔板等，一定保證干燥且干凈，避免鐵污染。

2、組織非血紅素鐵差異較小，一定每個組織和管子都稱重，國產(chǎn)管子的重量相差很多。

3、試劑盒是否過期驗證：取 10ul 鐵標準儲液(100μg/ml)加入 200ul 鐵顯色工作液，看是否顯色為深紅色，如是，則試劑沒過期，可繼續(xù)使用。

4、試劑有效性判讀：用空白管 1 作對照調零，如空白管 2 讀數(shù)＜0.004 說明沒有污染可以使用，如果空白管 2 讀數(shù)＞0.004，說明組織消化液有污染。

5、組織消化液有強酸性和腐蝕性，請小心操作。

6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6 個月有效，4℃運輸和保存。

非血紅素鐵檢測試劑盒(紅菲咯啉微板法)的計算