1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

8 nmol/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

4 nmol/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2 nmol/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

1 nmol/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

0.5 nmol/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，

然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。

【注意事項】

1.包被板須密封防潮。從冷藏環(huán)境中取出時，應平衡至室溫后，方可開封啟用。未使用完的板條應即時放回有干燥劑的自封袋中，4℃密封保存。

2.滴加試劑前應將滴瓶輕搖、混勻，首滴棄去；滴加試劑時瓶身應保持豎直。

3.瓶蓋每次使用后要蓋緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

4.孵育時，推薦使用水浴箱。如無水浴箱，可取密封濕盒放入37℃溫箱內使用。

5.用棄的試劑盒及樣本都應按污染物妥善處理。試劑盒內終止液有腐蝕性，須小心使用。